詳情介紹
諾博萊德 NHS磁珠 Magrose-NHS Magrose-NHS magnetic beads
- 產品貨號：M0239
- 產品名稱：NHS磁珠 Magrose-NHS Magrose-NHS magnetic beads
- 英文名稱：Magrose-NHS magnetic beads
- 產品規格：1ml/5ml
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
產品簡介：
說明：20%(v/v)
NobleRyderM0239 NHS磁珠 Magrose-NHS Magrose-NHS magnetic beads表面為NHS 基團修飾，能夠與帶有伯胺基團的蛋白和其他分子形成穩定的肽鍵，用于親和純化抗體、抗原和其他生物分子。與傳統的羧基、氨基磁珠相比，表面含 NHS 基團的磁珠無需事先采用EDC/NHS或戊二醛進行活化，只需簡單地將含伯氨基的生物配體溶解在試劑盒自帶的Coupling Buffer 中，室溫下將蛋白與NHS 磁珠混合1~2h 便可將生物配體共價偶聯到磁珠上，
具有操作簡單、偶聯條件溫和、生物配體偶聯快速高效等優點。磁珠偶聯過程必需在不含任何氨基的緩沖溶劑中進行。人工操作時，使用磁性分離架實現磁珠與溶劑分離。也可采用自動化設備操作，自動化操作適合用于多樣品的篩選。
一、蛋白偶聯操作流程及優化點
1、蛋白溶液的配制
2、磁珠的洗滌
3、蛋白偶聯：（優化）
(1)Coupling Buffer 的種類。首先通過實驗確定最合適的CouplingBuffer
(2)確定合適的CouplingBuffer 后，再通過實驗優化蛋白溶液的濃度
4、封閉
5、磁珠保存
6、注意事項：
(1)其中磁珠洗滌要嚴格按照說明書采用冷卻的WashingBufferA快速洗滌，以防磁珠在洗滌過程中NHS基團水解；
(2)蛋白偶聯過程中， 首先要通過實驗確定合適的CouplingBuffer（主要包括CouplingBufferA、Coupling Buffer B、50 mM 硼酸溶液，pH8.5、100mM 磷酸緩沖液，100mMNaCl，pH7.4 這四種）；
(3)確定合適的 CouplingBuffer 后，再以此 CouplingBuffer 為基礎，確定合適的偶聯蛋白濃度，因為蛋白濃度越高，偶聯到磁珠上的蛋白的量會越大（這是由于NHS基團跟蛋白偶聯和NHS 基團本身水解是一對競爭反應）。當然此處要綜合考慮使用性能和成本，有些客戶偶聯少量的蛋白便可滿足使用需求，這時采用低濃度的蛋白便可，這樣可以降低成本。
(4)封閉這一步可以采用試劑盒中自帶的3M乙醇胺，也可使用Tris 緩沖液（100mMTris-HCl,150 mMNaCl,pH 8.0），封閉時間不得低于2h，如果化學封閉后背景仍然很高，還可以額外加一步BSA封閉。
二、蛋白偶聯操作步驟
以下操作過程以取磁珠樣品500μL，采用1.5mLEP 管為例介紹。用戶可根據自身需求按比例調整：
1、蛋白溶液配制
取適量待偶聯蛋白用CouplingBuffer溶解，配成濃度為≥3.0mg/mL 的蛋白溶液。已經保存于buffer中的蛋白，需要通過透析或者脫鹽的方法che底除去原有buffer里含伯胺基的物質，然后再用Coupling Buffer 配成濃度為≥3.0 mg/mL 的蛋白溶液，將配制好的蛋白溶液于4℃保存備用。
注：(1)為了達到更好的性能，蛋白濃度≥3.0mg/mL，這樣偶聯效率會更高，此處需綜合考慮成本和使用要求；
(2)蛋白溶液中不能含有帶伯氨基的成分，比如 Tris，甘an酸，明膠，BSA 等；
2、磁珠清洗
(1)取 500μL20%的磁珠懸浮液于 1.5mLEP 管中。
注：磁珠取樣前要反復顛倒、使用渦旋振蕩器使其混合均勻，以保證實驗的同一性，每取一次樣需要重新混勻。
(2)將EP 管置于磁性分離架內，富集磁珠，去除上清液。
(3)加 1mL2~8℃的WashingBufferA于離心管中，渦旋 15s，使磁珠混合均勻。
(4)將EP 管置于磁性分離架內，富集磁珠，去除上清液。
3、蛋白質固定
(1)加 200μL 蛋白溶液于EP 管中，渦旋 30s，使其混合均勻。
注：磁珠洗滌后要立即加入蛋白溶液。
(2)將EP 管渦旋 15s，置于垂直混合儀上，室溫混合 2~4h。如果垂直混合不均勻，則反應前 30min，每隔 5min 取下EP 管渦旋 15s。此后，每隔 15min，取下EP 管渦旋 15s。
注：如有需要可以在 4?C 反應過夜。
(3) 采用磁性分離架富集磁珠，保存流穿液。
4、磁珠封閉
(1)加 1mLBlocking Buffer 于 EP 管中，渦旋 30s，將EP 管置于磁性分離架內，富集磁珠，棄上清液。
注：Blocking Buffer除了試劑盒中提供的 3M 乙醇胺外，也可以使用 100mMTris-HCl,150mM NaCl, pH 8.0 等其它封端試劑。
(2)重復“步驟4-1"四次。
(3)加 1mLBlockingBuffer于EP 管中，渦旋 30s，將EP 管置于垂直混合儀中室溫反應 2h。
(4)將EP 管置于磁性分離架內，富集磁珠，棄上清液。
(5)加 1mL 超純水于EP 管中，充分混合，用磁力架富集磁珠，棄上清液。
5、保存
(1)加 1mLStorageBuffer（比如含 0.05%疊氮化na的PBS 緩沖液，或者客戶根據自己實際需求選擇合適的保存溶液 ）于 EP 管中，充分混合，用磁力架富集磁珠，棄上清液。重復該操作 2 次。
(2)加入 1mLStorageBuffer 于EP 管中，充分混合，4?C 保存備用。
注：最終偶聯蛋白的磁珠濃度為 10%(v/v)。
三、注意事項
1、磁珠對水分敏感。為了保證產品質量，在取樣之后需立即蓋上瓶蓋，并用封口膜密封，于4℃保存。
2、禁止將磁珠干燥或冷凍。干燥和冷凍操作可能導致磁珠的聚集從而喪失結合活性。
3、可通過直接法（BCA ）檢測偶聯到磁珠表面的蛋白含量。使用280nm附近的波長來測定蛋白含量是不可取的，因為NHS 基團在280nm波長附近有很強的吸收，會嚴重干擾檢測結果。蛋白穩定劑（如 BSA，gelatin）會抑制抗體與磁珠的結合，因此在磁珠偶聯抗體過程中，需要確保抗體保存體系中不存在含伯氨基的蛋白穩定劑。
4、緩沖液中含有帶伯胺的物質會抑制蛋白質偶聯到磁珠表面，去除伯胺物質可采用透析和脫鹽的方法。
5、NHS 基團易水解，故在用 WashingBufferA 洗滌時，一定要參照說明書進行。
6、蛋白溶液要預先配制好，WashingBufferA 洗滌完畢后，要立即加入蛋白溶液進行偶聯反應。
7、蛋白質和磁珠的偶聯效率因蛋白質種類和性質差異而不同。一般而言，蛋白質濃度為≥3.0mg/mL 時利于蛋白質偶聯；然而，對于不同的蛋白其濃度需要優化。
四、產品訂購信息
M0239 NHS磁珠 Magrose-NHS Magrose-NHS magnetic beads 1ml/5ml
