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諾博萊德 線粒體蛋白提取試劑盒
線粒體蛋白提取試劑盒 常備現貨
產品貨號：P4929
產品名稱：線粒體蛋白提取試劑盒
產品規格：50T/100T
產品簡介：
中文名稱：線粒體蛋白提取試劑盒
規格：50T ; 100T
儲存條件：2-8℃，1 year
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
NobleRyder P4929 線粒體蛋白提取試劑盒
適用樣本：動物細胞/組織
產品介紹
線粒體蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代細胞 和各種實體組織，如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、 血管、結締組織等哺乳動物組織中提取線粒體蛋白。提取過程簡單方便。制備的線粒體蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。
本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解線粒體膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。
本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性 分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。
本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。
本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。
注：
1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3. 試劑拆封后請盡快使用完！
產品簡介：
線粒體蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代細胞和各種實體組織，如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等哺乳動物組織中提取線粒體蛋白。提取過程簡單方便。制備的線粒體蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。
本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解線粒體膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。
本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。
本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。
本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。
本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳。
自備試劑和儀器
離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套
產品特點：
1、使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
2、提取過程簡單方便，縮短了蛋白提取的時間。
3、含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
4、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
5、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含 7種獨立的蛋白酶抑制劑，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
使用方法：
一、使用注意事項：
1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得優良實驗效果
2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
3. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
4. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
5. 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
6. 最好使用Dounce勻漿器勻漿，如果沒有Dounce勻漿器，用普通國產0.5ml或1ml玻璃勻漿器勻漿也可，但是線粒體回收率會下降。
7. 組織樣品每50-100mg用剪刀盡可能剪碎后按下面步驟操作。
二、細胞線粒體提取：
1. 提取液準備：
根據樣本數量，每200ul冷的蛋白提取液C中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
【注】：
1) 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
2) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。
3) 以下步驟中使用的蛋自提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。
2. 取2×107個細胞，在4℃，500×g條件下離心5分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞。
【注】：
由于線粒體蛋白含量較少，需要較多的細胞才能保證得率。
3. 用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
【注】：
PBS 重懸細胞，1000×g條件下離心5分鐘
4. 在細胞沉淀中加入500ul冷的試劑A，置冰上5分鐘。
5. 用Dounce勻漿器勻漿30-40下。
【注】：
1) 先用 Dounce 勻漿器的松型槌初步勻漿 10-20 次，再用緊型槌勻漿 20-30 次。
2) 每上下一個來回為一次。
6. 在4℃，500×g條件下離心5分鐘。棄沉淀，將上清吸入另一預冷的干凈離心管。
7. 將上清在4℃，1000×g條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。
8. 將上清在4℃，10000×g條件下離心20分鐘。棄上清，收集沉淀。
9. 在沉淀中加入200ul冷的試劑B，充分混勻。
10. 在4℃，10000×g條件下離心20分鐘。棄上清，收集沉淀。
11. 在沉淀中加入80ul-150ul蛋白提取液C，充分混勻。置4℃振蕩20-40分鐘。
【注】：
1) 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。
2) 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。
12. 在4℃，10000×g條件下離心10分鐘。
13. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即得線粒體蛋白。
14. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
【注】：
1) 建議用BCA法進行蛋白定量。
2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。
三、組織線粒體提取：
1. 提取液準備：
根據樣本數量，每200ul 冷的蛋白提取液C中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰
上備用。
【注】：
1) 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
2) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。
3) 以下步驟中使用的蛋自提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。
2. 取 50-100mg 新鮮組織樣本，用手術jian刀盡可能剪碎。
【注】：
由于線粒體蛋白含量較少，需要較多的樣本才能保證得率。
3. 用冷PBS洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
【注】：
PBS 重懸細胞，500×g條件下離心5分鐘
4. 在細胞沉淀中加入400-500ul冷的試劑A，置冰上 10 分鐘。
5. 用Dounce勻漿器勻漿30-40下，然后在在4℃，500×g條件下離心5分鐘。
【注】：
1) 先用 Dounce 勻漿器的松型槌初步勻漿 10-20 次，再用緊型槌勻漿 20-30 次。
2) 每上下一個來回為一次。
6. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，棄沉淀。
7. 將上清在4℃，1000×g條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。
8. 將上清在4℃，10000×g條件下離心20分鐘。棄上清，收集沉淀。
9. 在沉淀中加入200ul-400ul冷的試劑B，充分混勻。
10. 在4℃，10000×g條件下離心20分鐘。棄上清，收集沉淀。
11. 在沉淀中加入80ul-150ul蛋白提取液C，充分混勻。置4℃振蕩20-40分鐘。
【注】：
1) 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。
2) 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可
3) 至無明顯沉淀。
12. 在4℃，14000×g條件下離心15分鐘。
13. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即得線粒體蛋白。
14. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
【注】：
1) 建議用BCA法進行蛋白定量。
2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。
常見問題：
①蛋白濃度低？
處理部分線粒體樣本時可能沒有裂解wan全，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑C的處理時間即可。最好在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。需要足夠的細胞或組織樣品的上樣量。
②用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
③提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。
注意事項：
1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得優良實驗效果。
2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
5. .最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器Ⅲ，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。實驗后完成后所有樣品及接觸過的器血應按照規定程序處理。
6. 本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。
線粒體蛋白提取試劑盒 常備現貨
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P4929 線粒體蛋白提取試劑盒 50T/100T
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