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FlashPure Plus Tissue/Cell/Insect Total RNA Mini Kit
動物組織/細胞/昆蟲總 RNA 提取試劑盒（帶 gDNA 過濾器）
動物組織/細胞/昆蟲總RNA快速提取試劑盒
目錄號：91218
產品內容
產品成份 | 91218-50（50 次） |
裂解液 ARL Plus | 30 ml |
去蛋白液 RW1 | 40 ml |
漂洗液 RW | 10 ml（需加入zhi定量無水乙chun） |
70%乙醇 | 9 ml（需加入zhi定量無水乙chun） |
RNase-Free H2O | 10 ml |
gDNA 過濾器和收集管 | 50 套 |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5 ml 離心管 | 50 支 |
RNase-Free 2.0 ml 液氮研磨管 | 50 支 |
自備試劑
無水乙chun
保存條件
室溫（15~25℃），有效期 12 個月。
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
產品簡介
適用于快速提取各種動物組織、細胞、昆蟲的總 RNA，gDNA 過濾器高效濾除 gDNA，RNA 可直接用于 RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉錄組測序、RACE 等。
產品特點
1. 無毒：免lv仿、免β-巰基乙chun！
2. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
3. 高效：提取全過程僅需 10 min！
重要提示：
① 第一次使用前，請先在漂洗液RW中加入無水乙醇，詳見標簽。
② 所有離心步驟均需要在室溫（15~37℃）下進行。
③ 高豐度樣本（肝臟、脾臟、腎臟、胰腺、心臟）的投入量減半。
操作步驟：
1. 動物組織、昆蟲：
a．電動勻漿：取新鮮組織 10~20 mg 加入 350μl的裂解液ARL Plus，電動勻漿，直到無明顯組織塊即可。
b．液氮研磨：在液氮中研磨組織成細粉，取10~20 mg組織細粉加入350μl裂解液ARL Plus，劇烈渦旋振蕩20sec，充分裂解。
注意：裂解 20~30 mg 組織，需要加入 600 μl 裂解液 ARL Plus。
c． 將勻漿后裂解物13，000 rpm 離心3min。
d．下接步驟 3。
2. 細胞
a．懸浮細胞：收集<107懸浮細胞到一個 1.5ml 離心管；
貼壁細胞（培養皿培養）：wan全吸棄培養基后，直接在培養皿中加入裂解液ARL Plus進行消化、裂解；
貼壁細胞（細胞瓶培養）：應該先用胰蛋白mei消化后吹打下來收集。
b．13,000 rpm 離心 10 sec，wan全吸棄上清，留下細胞團。
c．輕彈管底使細胞松散，然后加入350μl（<5x106 細胞）或600μl（5x106-1x107細胞）裂解液 ARL Plus，渦旋振蕩，充分混勻。
d．下接步驟 3。
貼壁細胞培養數量表：（細胞數量＞1x107，請酌情增加裂解液的用量）
培養器皿 | 面積（cm2） | 培養液量 （ml） | 細胞數量 |
96 孔培養板 | 0.32 | 0.1 | 105 |
24 孔培養板 | 2 | 1.0 | 5×105 |
12 孔培養板 6 孔培養板 3.5cm 培養皿 | 4.5 9.6 8 | 2.0 2.5 3.0 | 106 2.5×106 2×106 |
6cm 培養皿 | 21 | 5.0 | 5.2×106 |
9cm 培養皿 | 49 | 10.0 | 1.22×107 |
25cm 培養瓶 75cm 培養瓶 100cm 玻璃培養瓶 | 25 75 33 | 5.0 15～30 10 | 5×106 2×107 7x 106 |
3. 將裂解物上清或者裂解物全部加到gDNA 過濾器上（過濾器放在收集管內），立刻 13,000 rpm 離心1 min，保留濾液（RNA 在濾液中）。
4. 向濾液中加入等體積（350μl / 600μl）的70%乙醇，吹打混勻。
5. 每次吸取≤750μl濾液混合物轉入一個RNA吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm離心1min，倒棄濾液。此時，RNA被吸附在膜上，重復此過程，直到溶液全部上柱。
6. 加入700μl去蛋白液 RW1,室溫放置 1min,13,000 rpm 離心30sec，倒棄濾液。
7. 加入500μl漂洗液 RW，13,000 rpm 離心30sec，倒棄濾液。
8. 重復步驟7。
9. 把RNA吸附柱放回收集管中，13,000rpm 離心2min，che底除去膜上的乙醇。
10. 取出RNA吸附柱，放入一個RNase-free 1.5ml離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加30-50μl RNase-Free H2O，室溫放置1 min，13,000rpm離心 1 min。
11. 得到的 RNA，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，以免降解。
附錄：
一、免液氮直接研磨（自動研磨儀）——適用于新鮮樣本
a. 在 2.0 ml 液氮研磨管中加入4mm 兩粒，加600μl裂解液ARL plus，放進20 mg 左右的樣本，設置65個頻率，震蕩2min。
b. 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。
二、液氮研磨（自動研磨儀）:
a. 把研磨模塊丟到液氮中預冷，直到沒有氣泡冒出視為預冷完畢。
b. 在2.0ml液氮研磨管中放入3mm 鋼珠3粒，放進20-30mg 樣本，投入液氮中預冷。
c. 把預冷好的離心管插入研磨模塊中，放進研磨儀，設置 55 個頻率， 震蕩 30~60 sec。（以北京赫得研磨儀——京 N9548 為例）
d. 研磨完成后，馬上加 600 μl 裂解液 ARL Plus，劇烈渦旋振蕩,充分
混勻。
e. 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。
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