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PAX Blood miRNA Kit
(For PAXgene Blood RNA Tube)
PAX Blood microRNA Kit 核酸提取
目錄號：91511
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
產品簡介：
PAX Blood miRNA Kit設計用于從儲存在保存試劑和PAXgene®中的血液樣品中分離總RNA>18個核苷酸（包括miRNA）;血液 RNA 管。該程序可wan全去除污染物和酶抑制劑，從而產生高質量的 RNA。使用 PAX Blood miRNA 試劑盒純化的 RNA 可直接用于 RT-PCR 等應用。
從保存試劑中取出樣品。對于儲存在 PAXgene 中的血液樣本®血液 RNA 管，通過離心收集細胞。樣品在含有蛋白酶 K 的優化緩沖液下洗滌和裂解。將樣品離心以去除細胞碎片和其他顆粒。用異丙醇調整結合條件后，將樣品上樣到 RNA 結合柱上。通過短暫的離心或真空步驟，樣品通過結合 RNA/miRNA 的柱基質。經過三個洗滌步驟后，用不含 RNase 的水洗脫純化的 RNA/miRNA。
產品特點
配套PAXgene采血/RNA保存管提取血液microRNA
Kit Contents and Storage
Kit Contents | Storage | 50 Preps (91511-50) |
Resuspension Buffer | RT | 20 ml |
Binding Buffer | RT | 50 ml |
WashSolution 1 | RT | 12 ml Add indicated ethanol before first use |
WashSolution 2/3 | RT | 10 ml Add indicated ethanol before first use |
RNase-free H2O | RT | 10 ml |
DNase Buffer | –20 °C | 1.25 ml x 2 |
RNase free DNase I | –20 °C | 250 μl |
Proteinase K (20mg / ml) | –20 °C | 20 mg x 1 tube |
RNA Binding Columns | RT | 50 |
注意：
蛋白酶 K 是一種凍干物。離心幾秒鐘，然后用 1 ml 蒸餾水等分溶液復溶。在 –20 °C 下儲存。 避免反復凍融。所有試劑在zhi定溫度下儲存時，可穩定保存 9 個月。
描述：
PAX Blood miRNA Kit設計用于從儲存在保存試劑和PAXgene® Blood RNA Tube中的血液樣本中分離總RNA>18個核苷酸（包括miRNA）。該程序可wan全去除污染物和酶抑制劑，從而產生高質量的 RNA。使用 PAX Blood miRNA 試劑盒純化的 RNA 可直接用于 RT-PCR 等應用。
從保存試劑中取出樣品。對于儲存在 PAXgene® Blood RNA Tubes 中的血液樣本，通過離心收集細胞。樣品在含有蛋白酶 K 的優化緩沖液下洗滌和裂解。將樣品離心以去除細胞碎片和其他顆粒。用異丙醇調整結合條件后，將樣品上樣到 RNA 結合柱上。通過短暫的離心或真空步驟，樣品通過結合 RNA/miRNA 的柱基質。經過三個洗滌步驟后，用不含 RNase 的水洗脫純化的 RNA/miRNA。
用戶提供的材料和設備：
1. 微量離心機的離心能力為 13,000 x g
2. 100% 異丙醇
3. 不含 RNase 的過濾移液器吸頭
4. 不含 RNase 的水
5. 1.5 或 2.0 ml 微量離心管
6. 搖動培養箱或加熱塊，溫度可達 55°C、65°C
7. 帶水平轉子的離心機，離心力可達 5,500 x g
注意：
?shou次使用前，將規定量的乙醇加入 Wash 中溶液 1 和洗滌溶液 2/3 瓶，充分混合，并在瓶子上做標記用支票。
? 將培養箱或加熱塊加熱至 55°C。
1. 使用水平轉子以 3,000-5,000 x g 的離心力離心 PAXgene® Blood RNA 管 10 分鐘。
2. 吸出并丟棄上清液。
3. 加入 4 mL 不含 RNase 的水。渦旋以wan全重懸沉淀。
4. 使用水平轉子以 3,000-5,000 x g 的離心力離心 PAXgene® Blood RNA Tube 10 分鐘。
5. 吸出并丟棄上清液。
注意：不wan全去除上清液會降低裂解效率并稀釋裂解物，從而降低 RNA 產量。
6. 加入 350 μl 重懸緩沖液。渦旋以wan全重懸沉淀。
7. 將樣品轉移到新的 1.5 ml 微量離心管中。
8. 加入 300 μL 結合緩沖液和 20 μL 蛋白酶 K 溶液。渦旋 5 秒鐘以充分混合。
9. 使用振蕩培養箱在 55°C 下孵育 10 分鐘。
10. 可選：將裂解物通過安裝在注射器上的 20 號針頭（直徑 0.9 mm）至少 5 次，或使用電子組織勻漿器勻漿。此步驟剪切基因組 DNA，降低裂解物的粘度，提高產量。
11. 將勻漿以 13,000 rpm 離心 3 min。將上清液轉移到新的離心管中。
12. 加入等體積的 100% 異丙醇。渦旋充分混合。
13. 將最多 700 μl 混合物轉移至 2 ml 收集管（提供）中的 RNA 結合柱中。
14. 以最大速度離心 1 分鐘。
15. 吸出并丟棄濾液，重復使用收集管。
16.重復步驟 13-15，直到剩余樣品轉移到 RNA 結合柱中。
17. 加入 350 μl 洗滌液 1.
18. 以最大速度離心 1 分鐘。
19. 吸出并丟棄濾液，重復使用收集管。
20. 對于每個 RNA 結合柱，準備 DNase I 消化
reaction mix as follows:
Buffer | Volume per Prep | 10 Preps |
DNase I Buffer | 45 μl | 450 μl |
RNase-free DNase I | 5 μl | 50 μl |
Total volume | 50 μl | 500 μl |
重要提示：
• DNase I 對物理降解非常敏感，易受到影響。請勿對 DNase I 混合物進行漩渦混合。請通過翻轉試管輕柔混合。
• 請在 RNA 分離之前新鮮準備 DNase I 儲備溶液。
• 標準 DNase 緩沖液與膜上 DNase I 消化不兼容。使用其他緩沖液可能會影響 RNA 與基質的結合，并可能減少 RNA 的產量和純度。
• 所有步驟必須在室溫下進行。請快速但小心操作。21. 將 50 μl DNase I 消化反應混合物直接吸取到 RNA 結合柱的中心表面上。
注意：確保將 DNase I 消化混合物直接移液到
膜。如果一些混合物保留在 RNA 結合柱的壁或 O 形圈上，則 DNase I 消化將不wan全
22. 在室溫下靜置 15 分鐘。
23. 加入 350 μl 洗滌液 1.以最大速度離心 1 分鐘。
24. 吸出并丟棄濾液，重復使用收集管。
25. 加入 500 μl 洗滌液 2/3。以最大速度離心 1 分鐘。
26. 吸出并丟棄濾液，重復使用收集管。
27. 重復步驟 25-26 進行第二個洗滌液 2/3 洗滌步驟。
28. 以最大速度離心空的 RNA 結合柱 2 分鐘，以干燥柱基質。
注意：洗脫前干燥柱膜很重要。
殘留的乙醇可能會干擾下游應用。
29. 將 RNA 結合柱轉移到 1.5 mL 微量離心管中。
30. 將 50-70 μl 不含 RNase 的水直接加入到膜中心（可選：將水預熱至 70–90°C 將增加 RNA 產量）。在室溫下靜置 1 分鐘。
31. 以最大速度離心 2 分鐘。
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