土壤纖維素酶（Solid-cellulase，S-CL）活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

微量法 100 管/48 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

S-CL 主要來(lái)源于土壤微生物，S-CL 催化農(nóng)作物秸稈產(chǎn)生的葡萄糖是主要的碳源營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

測(cè)定原理：

采用蒽酮比色法測(cè)定S-CL 催化纖維素降解產(chǎn)生的還原糖的含量。

土壤纖維素酶活性測(cè)定試劑盒   土壤系列

試劑的組成和配制：

試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存； 臨用前加入 5ml 蒸餾水和 45ml 濃硫酸充分溶解待用。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀/可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、甲苯、硫酸（不允許快遞）和蒸餾水。

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過(guò) 30~50 目篩。

加樣表和測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 570nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表(在 1.5ml 棕色EP 管中按下表依次加樣）：

37℃振蕩反應(yīng) 3h 后，90℃水浴 15min（蓋緊，防止水分散失），冷卻后

8000g 25℃離心 10min，取上清，得糖化液

混勻， 90℃水浴 10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻，取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中，測(cè) 620nm 下吸光值A，計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

S-CL 活力計(jì)算：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 5.018x - 0.0462；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml），y 為吸光值。單位的定義：每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

S-CL 活力（mg/d/g）＝(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反總÷W÷T =19.1×(ΔA+0.0462)

T：反應(yīng)時(shí)間，3h=1/8d； V 反總：反應(yīng)體系總體積：0.6ml；W：樣本質(zhì)量，0.05g。

b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 2.5090x - 0.0462；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml），y 為吸光值。單位的定義：每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

S-CL 活力（mg/d/g）＝(ΔA+0.0462) ÷2.5090×V 反總÷W÷T =38.3×(ΔA+0.0462)

T：反應(yīng)時(shí)間，3h=1/8d； V 反總：反應(yīng)體系總體積：0.6ml；W：樣本質(zhì)量，0.05g。

土壤纖維素酶活性測(cè)定試劑盒   土壤系列