胃蛋bai酶（Pepsin）試劑盒說明書

微量法 100T/48S

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

胃蛋bai酶由胃粘膜主細(xì)胞分泌，分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別，慢性胃炎、慢性胃擴(kuò)張、慢性十二指腸炎等癥狀時(shí)也會(huì)引起胃蛋bai酶分泌的減少。

測(cè)定原理：

胃蛋bai酶可催化血紅蛋白水解，水解產(chǎn)物與福林試劑反應(yīng)后顯藍(lán)色；一定范圍內(nèi)，其顏色的深淺與胃蛋bai酶活性呈正比。

胃蛋bai酶（Pepsin）試劑盒 常備現(xiàn)貨

組成：

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 10ml 試劑二充分溶解。試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 10ml 蒸餾水充分溶解。

試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 15ml 蒸餾水充分溶解。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1.27ml×1 支，0.5μmol/ml 酪an酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度 4℃保存。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提取：

組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心 10min，取上清，即粗酶液。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 580nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三和試劑四置于 37℃水浴預(yù)熱 30min。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 20μl 標(biāo)準(zhǔn)品，40μl 試劑二，120μl 試劑五，20μl 試劑六，混勻后室溫靜置 20min，于 580 nm 測(cè)光吸收，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。

4. 空白管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 20μl 蒸餾水，40μl 試劑二，120μl 試劑五，20μl 試劑六，混勻后室溫靜置 20min，于 580 nm 測(cè)光吸收，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)空白管。

5. 對(duì)照管：取 EP 管，加入 100 μl 蒸餾水，置于 37℃水浴保溫 10min；加入 100μl 試劑四，蓋緊后搖勻1min；加入 20μl 粗酶液，混勻后 8000g 4℃離心 10 分鐘取上清；在微量玻璃比色皿/96 孔板加入上清液 20μl，再加入 40μl 試劑二，120μl 試劑五，20μl 試劑六，混勻后室溫靜置 20min，于 580 nm 測(cè)光吸收，記為 A 空白管。

6. 測(cè)定管：取 EP 管，加入 20μl 粗酶液，100μl 試劑三，置于 37℃水浴保溫 10min；加入 100μl 試劑四，

蓋緊后搖勻 1min；8000g 4℃離心 10 分鐘取上清；在微量玻璃比色皿/96 孔板加入上清液 20μl，再加入 40μl試劑二，120μl 試劑五，20μl 試劑六，混勻后室溫靜置 20min，于 580 nm 測(cè)光吸收，記為 A 測(cè)定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測(cè)定一次。

計(jì)算公式：

a. 使用微量玻璃比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1） 按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1nmol 酪an酸為 1 個(gè)酶活單位。

胃蛋bai酶活性（nmol/min/mg prot）= C 標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測(cè)定管－A 對(duì)照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）×稀釋

倍數(shù)÷（Cpr×V1）÷T

=27500×（A 測(cè)定管－A 對(duì)照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）÷Cpr

（2） 按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：37℃每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1nmol 酪an酸為 1 個(gè)酶活單位。

胃蛋bai酶活性（nmol/min/g 鮮重）= C 標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測(cè)定管－A 對(duì)照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）×稀釋

倍數(shù)÷（W×V1÷V2）÷T

=27500×（A 測(cè)定管－A 對(duì)照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.5 μmol/ml 酪an酸；稀釋倍數(shù)：（20+100+100）÷20=11；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測(cè)定；V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（ml），20μl=2×10-2ml；W：組織質(zhì)量（g）； V2：粗酶液總體積（ml），1ml；T：催化反應(yīng)時(shí)間（min），10min。

b. 使用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

（（1）按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1nmol 酪an酸為 1 個(gè)酶活單位。

胃蛋bai酶活性（nmol/min/mg prot）= C 標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測(cè)定管－A 對(duì)照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）×稀釋

倍數(shù)÷（Cpr×V1）÷T

=27500×（A 測(cè)定管－A 對(duì)照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：37℃每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1nmol 酪an酸為 1 個(gè)酶活單位。

胃蛋bai酶活性（nmol/min/g 鮮重）= C 標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測(cè)定管－A 對(duì)照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）×稀釋

倍數(shù)÷（W×V1÷V2）÷T

=27500×（A 測(cè)定管－A 對(duì)照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管）÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.5 μmol/ml 酪bai酸；稀釋倍數(shù)：（20+100+100）÷20=11；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測(cè)定；V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（ml），20μl=2×10^-2ml；W：組織質(zhì)量（g）； V2：粗酶液總體積（ml），1ml；T：催化反應(yīng)時(shí)間（min），10min。

注意事項(xiàng)

試劑三、試劑四、試劑五臨用前配制，配制好用不完的試劑 4℃可保存一周。

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