脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）活性試劑盒說明書

分光光度法

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

FAS 是脂肪酸合成關鍵酶，催化乙酰fu酶A 和丙二酰fu酶A 而生成長鏈脂肪酸。FAS 普遍表達于各種組織細胞中，在哺乳動物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達豐富。

測定原理：

FAS 催化乙酰CoA、丙二酰 CoA 和NADPH 生成長鏈脂肪酸和NADP⁺；NADPH 在 340nm 有吸收峰，而NADP⁺沒有；通過測定 340nm 光吸收下降速率，計算 FAS 活性。

脂肪酸合成酶活性試劑盒-常備現貨

組成：

BR6009-10T/9S:

試劑一：液體 10ml×1 瓶，－20℃保存。用前取出置于 4℃充分解凍后混勻。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 275 μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 275 μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 525 μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

BR6009-25T/24S:

試劑一：液體 25ml×1 瓶，－20℃保存。用前 1 d 取出置于 4℃充分解凍后混勻。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 550 μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 550 μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 1050 μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

BR6009-50T/48S:

試劑一：液體 50ml×1 瓶，－20℃保存。用前 1 d 取出置于 4℃充分解凍后混勻。

試劑二：粉劑×1 瓶。臨用前加入 1100 μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 1100 μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 2100μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

自備儀器和用品：

研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1ml 石英比色皿、可調式移液槍和蒸餾水。

粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進行冰浴勻漿。12000g，4℃離心 40min，取上清置冰上待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞數量（10⁴ 個）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 12000g， 4℃，離心 40min，取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體：直接測定。

FAS 測定操作：

1. 分光光度計預熱 30min，調節(jié)波長到 340 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑四置于 40℃水浴中預熱 30 min。

3. 測定管：在 1ml 石英比色皿中依次加入 100μl 上清液、20μl 試劑二、20μl 試劑三、820μl 試劑四和 40μl試劑五，迅速混勻后于 340nm 處測定吸光值，記錄第 30s 和 90s 時吸光值，分別記錄為 A1 和A2。△A 測=A1-A2。

FAS 活性計算公式：

（1） 按照蛋白濃度計算

活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個酶活單位。

FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反總×10⁹) ÷(Cpr×V 樣)÷T

=1608×△A÷Cpr

（2） 按照樣本質量計算

活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個酶活單位。

FAS(nmol/min/g 鮮重) = (△A÷ε÷d×V 反總×10⁹) ÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=1608×△A ÷W

（3） 按細胞數量計算

活性單位定義：37℃中每 10⁴ 個細胞每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個酶活單位。

FAS(nmol /min/10⁴cell) = (△A÷ε÷d×V 反總×10⁹) ÷(細胞數量×V 樣÷V 樣總)÷T

=1608×△A ÷細胞數量

（4） 按液體體積計算

活性單位定義：37℃中每毫升樣本每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個酶活單位。

FAS(nmol /min/ml) =(△A÷ε÷d×V 反總×10⁹) ÷V 樣÷T

=1608×△A

ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×10³/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V 反總：反應體系總體積，1000μl=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；V 樣：加入反應體系中上清液體積，100μl=0.1 ml； T：反應時間，1min。

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